Чому ми використовуємо метод Лоурі?

Аналіз білка Лоурі є широко використовуваним методом для кількісне визначення кількості білка в зразку. Він був розроблений Олівером Х. Лоурі та його колегами в 1951 році і з тих пір став одним із найбільш широко використовуваних аналізів білка завдяки своїй високій чутливості, точності та відтворюваності.

Аналіз білка Лоурі є біохімічним аналізом для визначення загального рівня білка в розчині. Загальна концентрація білка визначається зміною кольору розчину зразка пропорційно концентрації білка, яку потім можна виміряти за допомогою колориметричних методів.

Метод Лоурі чутливий у діапазоні від 5 до 150 мкг білка на аналіз. Його часто відзначають як більш послідовний, ніж аналіз Бредфорда. Через свою чутливість до низькомолекулярних пептидів і білків, метод Лоурі здатний більш точно оцінити підвищення чистоти під час фракціонування.

Переваги аналізу Фоліна-Лоурі Однією з переваг аналізу Фоліна-Лоурі є гнучкість вимірювання на будь-якій довжині хвилі від 650 нм до 750 нм з невеликою втратою інтенсивності кольору. Незважаючи на це, найкраще вимірювати при 750 нм, оскільки мало інших речовин поглинають на цій довжині хвилі.

Принцип визначення концентрації білка за методом Лоурі полягає в реакційній здатності пептидного азоту з іонами міді [II] в лужних умовах і подальшому відновленні фосфорно-молібденової фосфорно-вольфрамової кислоти Фоліна-Чокальтея до гетерополімолібденового синього за допомогою міді- …

Найпростішим і найбільш прямим методом визначення концентрації білка в розчині є виміряти абсорбцію при 280 нм (УФ-діапазон). Амінокислоти, що містять ароматичні бічні ланцюги (тобто тирозин, триптофан і фенілаланін), демонструють сильне поглинання ультрафіолетового світла.

За допомогою реактиву Фоліна-Чокальтеу для виявлення відновленої міді робить аналіз Лоурі майже в 100 разів більш чутливим, ніж реакція на біурет.