Що таке нуклеазний аналіз S1?

Аналізи захисту нуклеази (NPA), включаючи аналізи захисту рибонуклеази (RPA) і аналізи нуклеази S1, є надзвичайно чутливий метод для виявлення, кількісного визначення та картування специфічних РНК у складній суміші загальної клітинної РНК.

Нуклеаза S1 — це одноланцюгова ендонуклеаза, яка гідролізує одноланцюгову ДНК і РНК на 5΄-мононуклеотиди. Фермент додається в надлишку в реакцію травлення, щоб забезпечити повну деградацію дволанцюгової ДНК. Для нуклеази S1 потрібен цинк як кофактор.

Аналіз захисту нуклеази S1 дозволяє проводити специфічне порівняння між РНК і міченим ДНК-зондом, який є більш суворим і чутливим методом, ніж метод аналізу Нозерн-блот, але також є більш виснажливим і вимагає більше знань про структуру гена, який експресується та аналізується.

Нуклеаза S1 Aspergillus використовується в лабораторії як реагент у аналізах захисту від нуклеази. У молекулярній біології він використовується в видалення одноланцюгових хвостів з молекул ДНК для створення молекул з тупими кінцями та відкриття шпилькових петель, що утворюються під час синтезу дволанцюгової кДНК.

Нуклеаза S1 є ендонуклеаза, яка руйнує оцДНК і РНК. Фермент використовується для видалення виступаючих одноланцюгових кінців дволанцюгової ДНК, для селективного розщеплення одноланцюгової ДНК і картування транскриптів РНК.

Нуклеаза S1 є цинк-залежним2 ферментом (Ando, ​​1966; Vogt, 1973), який має висока специфічність для одноланцюгових або неповно парних полінуклеотидних структур.

Нуклеази є ферменти, що розкладають нуклеїнові кислоти. Вони класифікуються як рибонуклеази (РНКази), які атакують РНК, і дезоксирибонуклеази (ДНКази), які атакують ДНК. Більшість нуклеаз специфічні, хоча ступінь специфічності дуже різний.