Що такого особливого в Escherichia coli BL21?

BL21(DE3) є добре охарактеризованим та оптимізованим штамом, що дозволяє швидке зростання в стандартних бактеріальних середовищах. Він має відносно короткий час подвоєння, як правило, близько 20-30 хвилин, що означає, що він може швидко досягти високої щільності клітин під час фази експоненціального росту.

Такі характеристики, як дефіцит протеази, низька продукція ацетату при високому рівні глюкози та підвищена проникність (ймовірно, завдяки простій клітинній поверхні) роблять E. coli B бажаним господарем для виробництва генно-інженерних білків. BL21(DE3) дуже широко використовувався для експресії рекомбінантних білків.

Основні моменти

• Звичайна експресія не-T7.
• Дефіцит протеаз Lon і OmpT.
• Стійкий до фага Т1 (fhuA2)
• B Процідити.
• Без продуктів тваринного походження.

Клітини DH5-Alpha — це клітини E. coli, створені американським біологом Дугласом Ханаханом для максимізувати ефективність трансформації. Вони визначаються трьома мутаціями: recA1, endA1, які допомагають вставці плазміди, і lacZΔM15, яка забезпечує синьо-білий скринінг.

Компетентні клітини BL21(DE3)pLysS забезпечують більш суворий контроль експресії білків для експресії токсичних білків і є стійкими до хлорамфеніколу. При використанні з бактеріофагом CE6 клітини BL21 забезпечують найсуворіший контроль експресії білка (див. Штами BL21(DE3) і токсичність білка).

Навіщо використовувати клітини BL21 для експресії білка? BL21 E. coli дають високі рівні білка через дефіцит двох ключових протеаз (lon і ompT). Це дозволяє досягти високого рівня внутрішньоклітинного накопичення гетерологічних білків, одночасно зводячи до мінімуму деградацію білка під час очищення.